dna测序仪多少钱 作一次基因测序要多少钱

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一、DNA测序仪

这是我在网上找来的，自己感觉说的挺全的，你看看。

不过我要说一句，目前DNA测序所依靠的还是Sanger的原理，只是结合了荧光染料，提高了灵敏度。

DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今 DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。本实验介绍的是ABI PRISM 310型DNA测序仪的测序原理和操作规程。

【原理】 ABI PRISM 310型基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3''''末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物，使得四种荧光染料的测序 PCR产物可在一根毛细管内电泳，从而避免了泳道间迁移率差异的影响，大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同，在毛细管电泳中的迁移率也不同，当其通过毛细管读数窗口段时，激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测，激发的荧光经光栅分光，以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光，并在CCD摄影机上同步成像，分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列，从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。

它是一台能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定DNA片段的碱基顺序或大小和定量的高档精密仪器。PE公司还提供凝胶高分子聚合物，包括DNA测序胶(POP 6)和GeneScan胶(POP 4)。这些凝胶颗粒孔径均一，避免了配胶条件不一致对测序精度的影响。它主要由毛细管电泳装置、Macintosh电脑、彩色打印机和电泳等附件组成。电脑中则包括资料收集，分析和仪器运行等软件。它使用最新的CCD摄影机检测器，使DNA测序缩短至2.5h，PCR片段大小分析和定量分析为 10～40min。

由于该仪器具有DNA测序，PCR片段大小分析和定量分析等功能，因此可进行DNA测序、杂合子分析、单链构象多态性分析(SSCP)、微卫星序列分析、长片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析，临床上可除进行常规DNA测序外，还可进行单核苷酸多态性(SNP)分析、基因突变检测、HLA配型、法医学上的亲子和个体鉴定、微生物与病毒的分型与鉴定等。

1．BigDye测序反应试剂盒主要试剂是BigDye Mix，内含PE专利四色荧光标记的ddNTP和普通dNTP，AmpliTaq DNA polymerase FS，反应缓冲液等。

2．pGEM-3Zf( )双链DNA对照模板 0.2g/L，试剂盒配套试剂。

3．M13(-21)引物 TGTAAAACGACGGCCAGT，3.2μmol/L，即3.2pmol/μl，试剂盒配套试剂。

4．DNA测序模板可以是PCR产物、单链DNA和质粒DNA等。模板浓度应调整在PCR反应时取量1μl为宜。本实验测定的质粒DNA，浓度为0.2g/L，即200ng/μl。

5．引物需根据所要测定的DNA片段设计正向或反向引物，配制成3.2μmol/L，即3.2pmol/μl。如重组质粒中含通用引物序列也可用通用引物，如M13(-21)引物，T7引物等。

7．0.2ml或和0.5ml的PCR管盖体分离，PE公司产品。

8．3mol/L醋酸钠(pH5.2)称取40.8g NaAc·3H2O溶于70ml蒸馏水中，冰醋酸调pH至5.2，定容至100ml，高压灭菌后分装。

10．NaAc/乙醇混合液取37.5ml无水乙醇和2.5ml 3mol/L NaAc混匀，室温可保存1年。

12．模板抑制试剂(TSR) ABI产品。

14．ABI PRISM 310型全自动DNA测序仪。

17．台式高速离心机或袖珍离心机。

(1)取0.2ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂：

总反应体积5μl，不加轻矿物油或石蜡油，盖紧PCR管，用手指弹管混匀，稍离心。

(2)将PCR管置于9600或2400型PCR仪上进行扩增。98℃变性2min后进行PCR循环，PCR循环参数为96℃ 10s，50℃ 5s，60℃4min，25个循环，扩增结束后设置4℃保温。

(1)将混合物离心，将扩增产物转移到1.5ml EP管中。

(2)加入25μl醋酸钠/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10min以沉淀DNA。12 000r/min于4℃离心30 min，小心弃上清。

(3)加70%(V/V)的乙醇50μl洗涤沉淀2次。12 000r/min于4℃离心5min，小心弃上清和管壁的液珠，真空干燥沉淀10～15min。

(1)加入12μl的TSR于离心管中，剧烈振荡，让其充分溶解DNA沉淀，稍离心。

(2)将溶液转移至盖体分离的0.2ml PCR管中，稍离心。

(3)在PCR仪上进行热变性(95℃ 2min)，冰中骤冷，待上机。

4．上机操作按仪器操作说明书安装毛细管，进行毛细管位置的校正，人工手动灌胶和建立运行的测序顺序文件。仪器将自动灌胶至毛细管，1.2kV预电泳5min，按编程次序自动进样，再预电泳(1.2kV，20min)，在7.5kV下电泳2h。电泳结束后仪器会自动清洗，灌胶，进下一样品，预电泳和电泳。每一个样品电泳总时间为2.5h。电泳结束后仪器会自动分析或打印出彩色测序图谱。

5．仪器将自动进行序列分析，并可根据用户要求进行序列比较。如测序序列已知，可通过序列比较以星号标出差异碱基处，提高工作效率。

6．测序完毕按仪器操作规程进行仪器清洗与保养。

测序反应精确度计算公式：100%－差异碱基数(不包括N数)/650×100%

差异碱基即测定的DNA序列与已知标准DNA序列比较不同的碱基，N为仪器不能辨读的碱基。

1．ABI PRISM 310基因分析仪是高档精密仪器，需专人操作、管理和维护。

2．本实验测序PCR反应的总体积是5μl，而且未加矿物油覆盖，所以PCR管盖的密封性很重要，除加完试剂后盖紧PCR管盖外，最好选用PE公司的PCR管。如PCR结束后PCR液小于4～4.5μl，则此PCR反应可能失败，不必进行纯化和上样。

3．作为测序用户来说，只需提供纯化好的DNA样品和引物，一个测序PCR反应使用的模板不同，需要的DNA量也就不同，PCR测序所需模板的量较少，一般PCR产物需30～90ng，单链DNA需50～100ng，双链DNA需200～500ng，DNA的纯度一般是A260nm/A280nm为 1.6～2.0，最好用去离子水或三蒸水溶解DNA，不用TE缓冲液溶解。引物用去离子水或三蒸水配成3.2pmol/μl较好。

4．本实验使用的测序试剂盒是BigDye荧光标记终止底物循环测序试剂盒，一般可测DNA长度为650bp左右。本仪器DNA测序精确度为(98.5±0.5)%，仪器不能辨读的碱基N＜2%，所需测定的长度超过了650bp，则需设计另外的引物。为保证测序更为准确，可设计反向引物对同一模板进行测序，相互印证。对于N碱基可进行人工核对，有时可以辨读出来。为提高测序的精确度，根据星号提示位置，可人工分析该处彩色图谱，对该处碱基作进一步核对。

二、作一次基因测序要多少钱

1、基因测序预知未来健康状况费用1000多元

2、只要通过人体的一部分组织，如血液、头发等，就可以预知将来是否会出现肿瘤、老年痴呆、急性重症心脑血管疾病等，基因测序可以做到。昨天，记者探访了江苏省中医院病理科，这是我国惟一接受社会人员进行基因测序的地方。

3、省中医院病理科主任赖仁胜介绍，与B超、CT等检测不同的是，基因检测有“将来时”的意义。就拿肿瘤来说，当人体内的抗肿瘤基因发生突变后，就会变得很脆弱。不过，突变后的基因是否会发生癌变，很大程度取决于环境因素，如果生活方式不当，基因突变者往往有80%—90%在10—15年后就容易发生癌变。目前，已发现有6000多种疾病与基因和遗传有关，如先天性耳聋、腭裂、老年痴呆、急性重症性脑血管疾病、先天性小脑畸形等等。不过，其中只有不到100种是完全取决于基因的变化，不需要环境因素影响。

4、 50多岁的刘先生（化名）是南京某公司驻海外公司的老总，但是，自从去年他查出患有萎缩性胃炎后，就不再愿意出国工作了，因为萎缩性胃炎癌变的可能性较高，他担心在国外出事。刘先生在省中医院基因测序发现，“掌控”他是否会患癌的P53基因还没有突变，这就说明他在三五年内是不会癌变的。赖仁胜说，有高危因素但还没有出现基因突变的人三五年后要再检测一次。100多人预测心脑血管病

5、因为父母中有人死于重症心脑血管疾病，而且自己也有高脂血症等，有100多位这样的病人前往省中医院，要求预测是否将来会出现脑溢血、冠心病等。检测后，却意外地发现部分人将来会出现老年痴呆。赖仁胜告诉记者，是否出现急性重症心脑血管疾病关键在于看APOE基因的表现，APOE基因的6种不同表现中，APOE4预示着患老年痴呆的可能。在这100多人中，发现拥有APOE4基因的有17人。

6、昨天，记者在省中医院病理科看到，虽然基因测序室并不大，但是，专家表示，要把个体基因判读出来，则需要在不同仪器上来来回回“走”无数遍，因此需耗时10天左右。在该科，一般用于基因测序的是肿瘤组织或者血液标本，当技术人员从标本中抽取出DNA后，要选取出合用的DNA则是一项相当繁琐的工作，因为这需要无数次的检测，所以也特别耗时。选取成功后，就要上DNA测序仪测序，然后由专业技术人员判读、分析，再与国际惟一的标准比对，才能为检测者提供基因建议。随着基因研究的深入，国外除了医院，很多基因公司、网站都对外开展基因测序项目，不过，在我国这项工作更多的还是处于实验室，只有省中医院面向社会开放。赖仁胜解释道，并不是其他医院没有这项技术，最重要的一点是很多地方都没有收费标准。“我们能面向社会开展基因测序，还得感谢省物价局。虽然国家有政策允许医院开展基因测序，但是，我国目前只有江苏省物价局对基因测序收费进行了定价，其他地方因为没有定价也就无法面向社会开展。”说到此，记者明显感觉到了赖仁胜的遗憾。

7、据透露，做基因测序取决于基因长度，费用不等，大概在1000多元。

8、对于基因测序，赖仁胜表示有三大原则：高危人群鼓励做；与疾病有关的人群必须做；一般人群思考后再做。对于高危人群的定义，赖仁胜称，主要是指家族中有老年痴呆、急性重症心脑血管疾病或者肿瘤病人，或者出现了萎缩性胃炎、乳腺囊性增生症、宫颈不典型增生、肝硬化等癌前病变者。之所以建议这类人群接受基因检测，赖仁胜解释道，因为这些人检测或不检测都会处于忧虑之中，担心发生癌变或者和家人出现相同的疾病，检测后如果没有发现致病基因，那就可以放下心来，如果发现了致病基因，则可以积极、科学地寻找干预、治疗措施。赖仁胜还认为必须做检测的病人则主要是肿瘤病人。

9、省中医院对外开展基因测序至今已将近一年，赖仁胜说：“我们至今为400多人做了基因测序，基本上都是本院的住院病人，只有1/4左右是自己来主动要做的，不过并不是没有人愿意做，很多人被我们劝阻了。”对于临床意义不明显、家庭没有遗传疾病、个人没有癌前病变，主要是恐惧自己的未来健康，一般都会被劝阻做基因测序。

10、除此之外，团体检测几乎都会被拒。赖仁胜告诉记者，南京某事业单位曾要求为单位的20多名干部进行基因测序，不过，被赖仁胜开出的3000元一人的高价吓退了。赖仁胜笑道：“其实基因测序根本没有这么贵，只是我们得罪不起这样的单位，只能开高价吓唬。”至于不做集体检测的理由，赖仁胜表示，基因突变的几率在普通人群中在10%以下，这些人没有高危因素，那么检测出来就可能都是正常的，但是拿到一样报告的单位则不这么认为，会对基因检测产生误解。

三、DNA测序仪的试剂器材

1．bigdye测序反应试剂盒主要试剂是bigdye mix，内含pe专利四色荧光标记的ddntp和普通dntp，amplitaq dna polymerase fs，反应缓冲液等。

2．pgem-3zf( )双链dna对照模板 0.2g/l，试剂盒配套试剂。

3．m13(-21)引物 tgtaaaacgacggccagt，3.2μmol/l，即3.2pmol/μl，试剂盒配套试剂。

4．dna测序模板可以是pcr产物、单链dna和质粒dna等。模板浓度应调整在pcr反应时取量1μl为宜。本实验测定的质粒dna，浓度为0.2g/l，即200ng/μl。

5．引物需根据所要测定的dna片段设计正向或反向引物，配制成3.2μmol/l，即3.2pmol/μl。如重组质粒中含通用引物序列也可用通用引物，如m13(-21)引物，t7引物等。

7．0.2ml或和0.5ml的pcr管盖体分离，pe公司产品。

8．3mol/l醋酸钠(ph5.2)称取40.8g naac·3h2o溶于70ml蒸馏水中，冰醋酸调ph至5.2，定容至100ml，高压灭菌后分装。

10．naac/乙醇混合液取37.5ml无水乙醇和2.5ml 3mol/l naac混匀，室温可保存1年。

12．模板抑制试剂(tsr) abi产品。

14．abi prism 310型全自动dna测序仪。

17．台式高速离心机或袖珍离心机。

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