氯霉素检测，怎样检测氯霉素

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一、怎样检测氯霉素

（组织）氯霉素(CAP)j胶体金快速检测卡用于快速检测水产品（鱼虾蟹等）、畜禽肉及水体沉积物中的氯霉素残留，整个检测过程只需要30分钟左右，本试纸条为定性检测，检测卡灵敏度为0.2ppb。

（水体）氯霉素(CAP)j胶体金快速检测卡用于快速检测水体中的氯霉素残留，整个检测过程只需要10分钟左右，本试纸条为定性检测，灵敏度为0.3ppb。

氯霉素检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理，样品中的氯霉素在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线（T）上氯霉素－蛋白偶联物的结合。如果样品中氯霉素含量大于0.2ppb，检测线（T）线显色比C线浅，结果为阳性；反之，检测线（T）显色比质控线（C）深或者一样深，结果为阴性。

1、阴性（-）：检测线（T）显色比质控线（C）深或者一样深，表示样品中氯霉素浓度低于检测限或者不含氯霉素。

2、阳性（ ）：检测线（T）线显色比C线浅，或者检测线（T）不显色，表示样品中氯霉素残留浓度大于检测限。

3、无效：质控线（C）不显色；可能是操作不当或者检测卡失效。用新的检测卡重新检测。

二、氯霉素检测的反应原理

氯霉素酶联免疫检测试剂盒，主要是利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的，换句话说，就是利用酶标记物与样品中的氯霉素与微孔中的抗体进行竞争反应。在整个反应当中，如果样品中的氯霉素残留的越多，相对地就会竞争反应越多的酶标记物，使得能结合上抗体的酶标记物相对地减少，用TMB底物显色，样品中的氯霉素含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出氯霉素含量。

三、检测氯霉素的行业标准

氯霉素检验方法－－这是我们公司现在使用的方法，发上来大家指导指导

1.1氯霉素试剂盒，德国r-Biopharm公司

2.1微孔板酶标仪，MuLtisKan Ascent,芬兰Labsystens公司。

2.3单道移液器，5-50ul,20-200ml,100-1000ul,1-5ml

2.5旋转蒸发器，配真空冷却系统。

3.1样品提取称取约2g（准确至0.01g）蜂蜜于20ml具塞试管中，加入用4ml双蒸水溶解，再加4ml乙酸乙酯，在混匀器上混匀10分钟。将上述样液转至10ml离心管中，以4000转/分离心12分钟

3.2净化从上述离心管中移取1ml上层的乙酸乙酯（相当于0.5样品）至另一试管中，60℃以下减压旋转蒸干，残留物用0.5ml缓冲液1溶液，此为样品溶液，供酶标仪测定

4.2酶标测定（以下操作在20-24℃室温条件下进行）

将氯霉素酶试剂盒附带的所有试剂回升至室温20-24℃。其中氯霉素酶标记物、氯霉素抗体用缓冲液1以1；11的比例稀释，在吸取浓缩液之前，要仔细振摇使之充分混匀

4.2.2标准应用的制备；50uL标准浓缩液（氯霉素试剂盒附带）用450uL缓冲液1稀释并混合均匀用玻璃不能用塑料瓶

标准应用液1：50uL标准浓缩液1用450uL缓冲液1稀释oppt

标准应用液2：50uL标准浓缩液2用450uL缓冲液1稀释50ppt

标准应用液3：50uL标准浓缩液3用450uL缓冲液1稀释150ppt

标准应用液4：50uL标准浓缩液4用450uL缓冲液1稀释450 ppt

标准应用液5：50uL标准浓缩液5用450uL缓冲液1稀释1350ppt

标准应用液6：50uL标准浓缩液6用450uL缓冲液1稀释4050ppt

取出实验需要数量的微孔板条，按顺序加入50ul标准或处理好的样品到各自的微孔中，加入50ul稀%@FI

释了的酶标记物到微孔底部，加入50ul稀释了的抗体溶液到每一个微孔中充分混合（轻轻振荡板并在桌面上做圆周运动以混均）用薄膜覆盖板上在室温孵育2小时（注意在加入抗体的过程中移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体，避免交叉污染）

倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打（拍打4次）以保证完全除去孔中的液体，用250ul蒸馏水充入孔中（轻轻振荡板并在桌面上做圆周运动），再次倒掉微孔中液体，重复操作两遍。注意在洗板过程中加洗涤水的移液器管尖必须置于微孔板上方约1厘米处打出洗涤水。洗板后立即进行下一步

迅速加入50ul基质及50ul发色剂到每一个孔中，轻轻振荡板并在桌面做圆

周运动以混均。室温孵育微孔板30分钟，注意暗处避光放置。在恒温孵育期间准备好反应停止液

加入100ul反应停止液，混匀。立即测量，如果不能立即测量请放置在暗处并于60分钟内450nm测量OD值

以2 ml双蒸水代替样品，按上述步骤提取

所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准（0标准）的吸光度值再乘以100，因此0标准等于100%，吸光度值的百分比表示。

计算标准的值并绘成一个以氯霉素浓度（ng/kg）为半对数坐标系统的曲线图，曲线在50-1350ng/kg(ppt)范围内应当成为线性。相对应每一个样品的浓度（ng/kg）可以从校正曲线上读出。为了获得样品中氯霉素的实际浓度（ng/kg）,从校正曲线上读出的浓度值必须乘以相对应的稀释系数。（可采用Labsystens公司提供的MuLtisKan Ascent软件，从计算机上编制测定程序并进行数据处理，可直接读取样品氯霉素的浓度值）。7.方法的检出限、回收率

7.1本方法氯霉素的检出限为125ng/kg(ppt)

对蜂蜜样品进行的回收率实验,结果如下表示.

样品本底值(ng/kg)添加值(ng/kg)测定值回收率

四、氯霉素检测的介绍

氯霉素属广谱抗生素，曾在畜牧业中广为应用。但氯霉素有较强的副作用和毒性作用，如果氯霉素在食用动物中残留，可通过食物链传给人类，长期微量摄入氯霉素，不仅使人体肠道正常菌群失调，而且还会引起多种疾病，对人类的健康造成危害。世界上许多国家禁止此药用于生产食品动物，并规定了在畜产品中氯霉素不得检出。

好了，关于氯霉素检测和怎样检测氯霉素的问题到这里结束啦，希望可以解决您的问题哈！